Tris:trimethylolのaminomethane
Trismethylaminomethane (Tris)は方式の有機化合物です(生物化学および分子生物学の実験の緩衝を準備するのにHOCH 2) 3CNH 2. Trisが使用されています。生化学的な実験で使用されるTAEおよびTBEの両方緩衝は(核酸を分解するのに使用される)アミノ グループを含んでいるときアルデヒドと凝縮できるTrisを要求します。特徴Trisを緩衝することは弱い基盤です。室温(25°C)は、pKa 8.1です。緩衝理論に従って、Trisの緩衝の有効なバッファ範囲はpH 7.0および9.2の間にあります。
Trisの基盤の水溶液のpHは約1 0.5です。通常、塩酸は希望値に水素イオン濃度指数を合わせるために加えられそれからこの水素イオン濃度指数の緩衝液は得ることができます。しかし同時に、TrisのpKaの温度の影響は管理されますべきです。
Trisの緩衝が弱いアルカリ解決であるので、DNAはそれにより容解性を改善するそのような解決で、deprotonated。人々は頻繁にTrisの塩酸の緩衝に「TE緩衝」をするためにエチレンジアミン四酢酸を加えます。TEの緩衝はDNAの安定および貯蔵のために使用されます。pH調節された酸解決が酢酸と取り替えられれば、ホウ酸取り替えられれば「TAE緩衝」は(Tris/Acetate/EDTA)、「TBE緩衝」のと(Tris/Borate/EDTA)得られます得られ。これら二つの緩衝は核酸の電気泳動の実験で使用されます。
1つのM Tris HCl (pH7.4、7.6、8.0)
構成の集中1M Tris HCl
準備の容積1L
準備方法:
1. 1Lビーカーに121.1g Trisの重量を量って下さい。
2. 脱イオンされた水の800mlについて加え、分解するためにかき混ぜて下さい。
3. 必須の水素イオン濃度指数を調節するために次テーブルに示すように集中されたHClの量を加えて下さい。
pHによって集中されるHCl
70mlについての7.4
60mlについての7.6
42mlについての8.0
4. 1つのL.に解決を持って来て下さい。
5. 高温および高圧殺菌の後で、室温で貯えて下さい。
注:解決が水素イオン濃度指数を調節する前に室温に冷却するようにして下さいTrisの解決の水素イオン濃度指数が温度と非常に変わるので。温度が1°Cによって増加するとき、解決の水素イオン濃度指数は約0.03単位につき減ります。
1.5 M Tris HCl (pH8.8)
構成の集中1.5M Tris HCl
準備の容積1L
準備方法
1. 1Lビーカーの181.7g Trisの重量を量って下さい。
2. 脱イオンされた水の800mlについて加え、分解するためにかき混ぜて下さい。
3. 集中されたHClとの8.8にpHを合わせて下さい。
4. 1つのL.に解決を持って来て下さい。
5. 高温および高圧殺菌の後で、室温で貯えて下さい。
注:解決は水素イオン濃度指数を調節する前の室温にTrisの解決の水素イオン濃度指数が温度と非常に変わるので冷却されるべきです、
温度のあらゆる1°C増加のために、解決のpHはおよそ0.03単位につき減ります。
Tris HCl緩衝の利点は次のとおりです:
Trisの基盤がアルカリであるので①、酸性からのアルカリに水素イオン濃度指数の広い範囲が付いている緩衝液を準備するのにこの緩衝システムを使用できます;
②生化学的なプロセスへの少し干渉、カルシウムが付いている沈殿物無し、マグネシウム イオンおよび重金属イオン。
不利な点は次のとおりです:
①は解決の集中によって緩衝液の水素イオン濃度指数非常に影響されます、緩衝液は10回薄くなり、水素イオン濃度指数の変更は0.1より大きいです;
②は温度効果大きく、温度変化に緩衝液の水素イオン濃度指数の大きい影響が、あります即ち:△pKa/℃=-0.031、例えば:4℃=8.4の緩衝液、そして水素イオン濃度指数、従って37℃= 7.4のそれのpHは0の℃ | 4 ℃で使用温度で室温で準備されるTris HCl緩衝使用することができません準備されなければなりません。
③空気の二酸化炭素を吸収することは容易です従って準備された緩衝は堅く密封されるべきです。
④はある特定のpHの電極によってこの緩衝液干渉します、従ってTrisの解決と互換性がある電極を使用して下さい。
Trisの解決は生殖不能症を要求すれば、ナトリウムのアジ化物を加えることができます空気からの二酸化炭素、貯蔵の間の密封への注意吸収できます。
TEはTrisエチレンジアミン四酢酸の緩衝(10mM Trisの1mMのエチレンジアミン四酢酸、pH7.4 pH7.6 pH8.0)です。
DNAの分解のための一般的な分子生物学の試薬。
10×TE緩衝準備して下さい(pH7.4、7.6、8.0)を
構成の集中:100mM Tris HClの10mMのエチレンジアミン四酢酸
準備の容積:1L
準備方法:
1. 次の解決を測定し、1Lビーカーに置いて下さい。
1MのTris HCl緩衝(pH7.4、7.6、8.0) 100つのml
500のmMのエチレンジアミン四酢酸(pH8.0) 20ml
2. 脱イオンされた水の800mlについてビーカーに加え、均等に混合して下さい。
3. 1Lに容積を合わせた後、高温および高圧で殺菌して下さい。
4. 室温で貯えて下さい。