化学発光検査は,優れた検出感度によりますます普及しています.ルミノール化学分析では,化学発光反応を使用して,化学発光化合物によって直接共性的にラベル付けされた分析物を検出する.発光反応の化学発光ラベルを起動すると,分析物質の検出のための信号が生成される.この方法の利点は,よりシンプルで明確で,より大きな,比較的"粘り強い"ラベルを必要としないことです.しかし,検出反応を選択するための要因は,酵素のラベルか直接のラベルか反応を設計する前に,光の強度を決定する方法も考慮する必要があります.
酵素のラベル付けか直接ラベル付けか? 化学発光を生成する一般的な方法は,化学発光反応を催化するためにラベル付けされた酵素を使用することです.各ラベルは複数の化学発光反応を誘発する化学発光化合物は,飽和運動性を確保するために,過剰に酵素基質として供給されます.光の強度は,標識された酵素の量に線形関数です発光量は,光子分子の放出速さで,基板の触媒変換と発光化合物の寿命の産物である.
化学発光強度/時間分布グラフには,初期上昇期間とプラトーまたは偽プラトーまで発光を延ばすが含まれます.安定したプラトー値がない場合,基質が枯渇し,酵素が非活性化していることを示します.酵素によって生成される化学発光の検出は測定プロセスに大きな柔軟性をもたらします.高点を通過する任意の時点での光の強さは,酵素の量に関連している可能性があります.速度が単点または多点傾斜型測定問題である場合,上昇部分で測定できます.しかし,最高感度を得るためには,適した化学発光化合物は多くありません適切な候補は,まず他の分子との接続を許可する特定の機能を持つ必要があります. さらに重要なのは,タグが起動すると,できるだけ短時間で光を放つべきです.
化学発光が一定時間間に渡って徐々に放出されると,信号強度 (光子/秒) が低下します.発見される種に対する化学発光標識の最適な数を,経験に基づいて決定することが最善です理論的にはより多くのタグがより多くの光子を供給すべきですが,タグが互いに近づいている場合,消化効果が発生します.表面面積と派生可能なグループ数 (通常アミノまたはメルカプトグループ) は,さらなる制限を提供します.実際には,1つのマクロ分子に最大10〜20のラベルが結合できる.さらに,結合分子表面にラベルが多くなるほど,標識が結合特性を妨げる可能性が高くなる.
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