血清または血中における自由脂肪酸の測定は,通常,トリンダー染色体酵素光測定法を採用する.しかし,この試験の特性により,脂肪酸の検出には多くの要因が影響します検出の精度を向上させるために検出方法を最適化し改善する必要があります.
トリンダークロモゲン検出 FFA 原則:
検知方法は3つの反応段階がある.自由脂肪酸 (FFAまたはNEFA) は,アセチル-CoAシンタゼ (ACS) の作用下で,過剰なCoAと反応し,アシル-CoAを生成する.アセチル-CoA酸化酶 (ACO) の作用下で酸素と反応する反応により2,3-トランスエノイルCoAと過酸化水素が生成され,トリンダー反応を使用して過酸化水素を検出し,FFAの含有量を得ることができる.
クロモゲンのFFAの決定にはTOPSが推奨される.
FFAの決定と最適化方法における問題:
1反応中の過剰なコエンザイムAは,水素過酸化物とトリンダー染色体の反応を妨害し,全体の検査結果が低くなる.N-エチルマレイマイド (NEM) は,過剰なコエンザイムAを除去するために使用できます.NEMの安定性は非常に影響を受けています. 限定,たった1週間です.
2使用されたアセチルCoA合成酶とアセチルCoA酸化酶は,異なる自由脂肪酸に対する異なる基板特異性があり,決定結果の違いを引き起こす.異なる酵素源は,異なるC鎖長を持つ自由脂肪酸に対する異なる基質特異性を持っていますつまり,反応能力は異なる.ヒト血清には6種類のFFAがあり,それらに高い特異性を持つ酵素だけが測定結果に変化を起こすことはできません.
3. CoA が反応に及ぼす影響により,データ結果の線形範囲は狭い.市場で測定されるFFAの色はMEHA,TBHB,TOOSなどですが,CoAによって大きく干渉されます.そしてそれは過剰である必要があります染色素が少ない.SCEPはコエンザイムAによって干渉されないが不安定である.ADOSとTOPSはCoAによって干渉が少なく,TOPSはより高いモラー吸収系数を有する.塩基配列の塩基配列が.
4. NEMの量を減らすために硫化水素複合体DTNBとMITを追加する. DTNMの硫化水素グループは,クロモゲンへの干渉を除去するためにCoAの硫化水素グループと反応することができる.小量のMITはCoAの硫化水素群を除去し,保存剤としても作用しますTOPSクロモゲンの使用により,CoAの干渉は完全に除去され,安定性は大幅に改善されます.
FFA 測定結果に対する要求が高くなった場合,上記ポイントに基づいて より質の高いキットを選択できます.デシェンは,FFAおよび他の指数決定キットのための原材料を生産しています.溶液の安定性が低いため,直接FFAを決定するためにTOPSを使用する場合,使用前に直ちに使用するために有効な溶液を準備することが推奨されます.
