血清または血しょうの脂肪酸なしの決定は通常Trinderの色原体の酵素の測光方法を採用する。但し、このテストの特徴が原因で、脂肪酸の検出は多くの要因によって影響され、検出の正確さを改善するために検出方法は最大限に活用され、改善される必要がある。
Trinderの色原体の検出FFAの主義:
検出方法に3つの反作用のステップがある:脂肪酸なしは余分なCoAと(FFAかNEFA)アセチルCoAシンターゼの行為の下でアシルCoAを(ACS)発生させるために反応し酸素とアセチルCoAオキシダーゼの行為の下で反応する(ACO)。反作用は2,3 TRANSenoyl CoAおよび過酸化水素を発生させ、過酸化水素を検出するのにTrinderの反作用が使用されFFAの内容は得ることができる。
上は色原体のFFAの決定のために推薦される
FFAの決定および最適化方法の問題:
1. 反作用の余分な補酵素Aは全試験結果の低速を作る過酸化水素およびTrinderの色原体の反作用と干渉する。N-ethylmaleimideが(NEM)余分な補酵素A.を取除くのに使用することができる。NEMの安定性は非常に影響を受けている。、1週だけ限られた。
2. 使用されるアセチルCoAのシンセターゼおよびアセチルCoAのオキシダーゼに決定の結果で相違を引き起こす異なった脂肪酸なしのための異なった基質の特定性によりある。異なった酵素源に異なったCのチェーン長さの脂肪酸なしのための異なった基質の特定性がある。すなわち、応答容量は異なっている。6種類の人間の血清のFFAがあり、それらへの高い特定性の酵素だけ測定の結果の違いを生じないことができる。
3. 反作用のCoAの影響が原因で、データ結果の線形範囲は狭い。FFAの色は市場でであるMEHA、TBHB、TOOS、等測定したが、CoAによって非常に干渉され、余分でなければならない従って干渉は要求される。より少ない色原体。SCEPは補酵素Aによって干渉しなかったりである不安定ないが。騒ぎおよび上はCoAによってより少なく干渉したあり、上により高いモルの吸収係数がある、従ってそれはよりよい色原体の基質である。
4. NEMの量を減らすためにスルフヒドリル複雑なDTNBおよびMITを加えなさい。DTNMのスルフヒドリル グループはCoAのスルフヒドリル グループと色原体に干渉を取除くために反応できる。わずかMITはCoAのスルフヒドリル グループを取除くことができ、また防腐剤として機能する。上の色原体の使用に基づいて、CoAの干渉は完全に除去することができ安定性は非常に改善される。
FFAの決定の結果のためのより高い条件があれば、上記のポイントに基づいて良質のキットを選ぶことができる。DeshengはFFAおよび他の索引の決定のキットのための原料を作り出す。FFAを直接定めればのに上が使用されていれば使用の前に即時の使用のために使用液を準備することを推薦する解決、の悪い安定性が原因で。