HEPESバッファ4ヒドロキシエチルピペラジン-エタノ硫酸 (N-a-ヒドロキシエチルピペラジン-N-Eタノ硫酸),白い結晶粉末,水素離子バッファで,長期間にわたって恒定なpH範囲を制御できる.効果性バッファ範囲はpH6.8〜8です2タンパク質抽出溶解バッファ,細胞培養バッファなどに一般的に使用されます.
HEPESの離離定数は 7 です.5HEPES とその Na-HEPES を均質な混合時,溶液の pH は 7 です.5通常,まずはHEPESの固定モラー濃度が調製され,その後,強い塩基 (一般的に一般的に使用されるNaOH) を使ってpHを指定値に調整します.NaOHはOHを供給するだけ. KOH のような他の強い塩基も使用できます. pH 差が大きい場合,濃縮 NaOH を使用します. 精調のために,稀释された NaOH を使用します. NaOH 固体が直接加わると,誤りは大きすぎる温度の変化は,pH電極の精度に影響を与える可能性があります.
HEPES 溶解バッファ製剤:
| 溶液A: | 溶液B: | ||
| HEPES | 10mmol/L,pH79 | HEPES | 20mmol/L,pH79 |
| KCl | 10mmol/L | NaCl | 420mmol/L |
| MgCl2 | 1.5mmol/L | MgCl2 | 1.5mmol/L |
| DTT | 1mmol/L | DTT | 0.5mmol/L |
| 甘油 | 5% | グリセリン | 25% |
| EDTA | 0.2mmol/L | EDTA | 0.2mmol/L |
| NP-40 | 1% | ||
| PMSF (使用前に追加) | 1mmol/L | PMSF (使用後添加) | 0.5mmol/L |
| アプロチン | 3mg/L | アプロチン | 5mg/L |
| ルーペプチン | 3mg/L | ルーペプチン | 5mg/L |
| ペプスタイン | 2mg/L | ペプスタイン | 3mg/L |
ステップ:
1細胞をEPチューブに集め,遠心分離 (4000r/min,5min,4度)
2PBS で 3 回洗い,上記のように遠心分離し,上位剤を捨てます.
3バッファーA100μlを加え,氷の上に10分間保育し,遠心分離 (1000回/分14000回/分1分) して,上位剤を廃棄する.
4弾丸を60マイクロリットルのバッファBに再 суспенダし,よく混ぜて,氷の上に30分遠心分離して,遠心分離して (14000r/min, 15min, 0°),上層物質を集め,弾丸を捨てます.
リン酸Aの役割は,主に細胞質タンパク質と膜タンパク質を放出するために使用され,リン酸Bは核タンパク質を放出するために使用され,NP-40は表面活性剤と洗浄剤の両方です.細胞膜を破壊する (軽度)降水防止のため,放出されたタンパク質と結合できる.細胞質タンパク質と膜タンパク質のほとんどは,最初のステップで遠心分離によって上位物質が除去された後に除去することができます.核タンパク質を抽出した後,リサートAで2時間ダイアリシスされ,IPに組み合わせることができます.または他の溶液で稀釋され,IPまたは他の実験のための濃縮した遠心分離管で置き換えられる..
デシェングのインビトロ診断用試料の主な原材料は: 1.生物的なバッファ トリス,ビシン,ヘプス,キャプス,MOPS,TAPS,EPPS,MOPSO,パイプス,PEP; 2.化学発光反応剤ルミノール,アイソルミノール,アクリジンエステルDMAE-NHS,アクリジンエステルNSP-DMAE-NHS,アクリジン塩NSP-SA,アクリジン塩 NSP-SA-NHSアクリジンヒドラジドNSP-SA-ADH,アクリジンエステルME-DMAE-NHS; 3.ニュートリンダーの反応剤TOOS,TOPS,ADOS,ADPS,ALPS,DAOS,HDAOS,MADB,MAOS; 4.血液採集管用添加剤のための抗放射線分離ゲル血凝固剤,血凝固粉末等を促す. さらに,ウイルス輸送媒質とカルボマー940/90も生成する.買い物をする友人を歓迎します.
