HEPESは4-hydroxyethylpiperazine-ethanesulfonic酸（N'-a-hydroxythylpiperazine-N'-ethanesulfanicの酸）、白い水晶粉、一定したpHの範囲を長い間制御できる水素イオン緩衝です。有効なバッファ範囲はpH6.8-8.2です。一般的蛋白質の抽出の換散の緩衝、細胞培養の緩衝、等を準備するため。
HEPESの分離の定数は7.5です。等モルときのHEPESおよびNaHEPESの混合は、解決のpH 7.5です。通常、HEPESの固定モル集中は最初に準備され、それからpHは強い基盤（一般に一般的なNaOH）とのある値に合わせられます。ここでは、NaOHはただオハイオ州を提供するのに役立ちます。水酸化カリウム溶液のような他の強い基盤を使用することもまた可能です。pHの相違が大きいとき、集中されたNaOHを使用して下さい。微調整のために、希薄なNaOHを使用して下さい。NaOHの固体が直接加えられれば、間違いはpHの電極の正確さに影響を与えるには余りにも大きく、NaOHが分解された発熱のとき温度を変えることはかもしれなく。
HEPESの換散の緩衝準備:
| 換散の解決A: | 換散の解決B: | ||
| HEPES | 10mmol/L、pH7.9 | HEPES | 20mmol/L、pH7.9 |
| KCl | 10mmol/L | NaCl | 420mmol/L |
| MgCl2 | 1.5mmol/L | MgCl2 | 1.5mmol/L |
| DTT | 1mmol/L | DTT | 0.5mmol/L |
| 甘油 | 5% | グリセリン | 25% |
| エチレンジアミン四酢酸 | 0.2mmol/L | エチレンジアミン四酢酸 | 0.2mmol/L |
| NP-40 | 1% | ||
| PMSF （使用の前に加えて下さい） | 1mmol/L | PMSF （使用の後で加えて下さい） | 0.5mmol/L |
| aprotinin | 3mg/L | aprotinin | 5mg/L |
| leupeptin | 3mg/L | leupeptin | 5mg/L |
| pepstainA | 2mg/L | pepstainA | 3mg/L |
ステップ:
1. EPの管および遠心分離機（4000r/min、5min、4度）に細胞を集めて下さい。
2. 上で、上澄みを放棄しなさいようにPBSの3回を洗浄して下さい、遠心分離機にかけて下さい。
3. 緩衝Aの100 μlを加え、10分のための氷で孵化させ、（14000 r/min、1分）遠心分離機にかけ、そして上澄みを放棄して下さい。
4. 緩衝Bの60マイクロリットルの餌を再停止し、30minのための氷の遠心分離機、遠心分離機（14000r/min、15min、0度）よく混合し、上澄みを集め、そして餌を放棄して下さい。
その中で細胞質蛋白質および膜蛋白質を解放するのに、lysate Aの役割が主に使用されています核蛋白質を解放するのにlysate Bが使用されていますNP-40は界面活性剤および洗剤両方です、細胞質蛋白質の沈殿物を、そう最も防ぐために役割は上澄みが第一歩の遠心分離によって取除かれた後細胞膜を（穏やかな）で、解放された蛋白質と結合できます破壊し、膜蛋白質は取除くことができます両方。核蛋白質は得られた後、2hのためのlysate Aと透析され、IPのために結合することができます;または他の解決と薄くされ、IPまたは他の実験のための集中された遠心分離機管によって取り替えられて。
Deshengの生体外の診断試薬の主要な原料は次のとおりです:1. Bisの緩衝Tris、BICINE、HEPESの帽子、モップ、蛇口、EPPS、MOPSOの管、PEP;2.化学ルミネセンスの試薬のluminol、isoluminol、アクリジンのエステルDMAE-NHSのアクリジンのエステルNSP-DMAE-NHSのアクリジンの塩NSP-SAのアクリジンの塩NSP-SA-NHSのアクリジンのヒドラジッドNSP-SA-ADHのアクリジンのエステルME-DMAE-NHS;3。新しいTrinderの試薬TOOSの上、騒ぎ、ADPSのアルプス、DAOS、HDAOS、MADB、MAOS;4.血のコレクションの管の添加物のための反照射の分離のゲル、ナトリウムのヘパリン、リチウム ヘパリン、EDTA-2K3K、EDTA-2NAは、さらに凝固剤、凝固の粉、等を促進します、またウイルスの輸送媒体およびcarbomer 940/980を作り出します。買うことを来る歓迎された友人。
