4-ヒドロキシエチルピペラジンエタンスルホン酸は、英語ではHEPES と略され、CAS番号は7365-45-9です。白色結晶性粉末として現れ、6.8〜8.2の安定したpH範囲を持ちます。生物学的緩衝剤として、pH調整が最も一般的な用途であり、スキンケア分野の大手メーカーから高く評価されています。しかし、狂犬病ウイルスの検出における重要な役割はあまり知られていません。以下に詳細な紹介をします。
従来の狂犬病ウイルス検出方法のジレンマ
狂犬病ウイルスが感染細胞内で増殖する際、通常、細胞変性効果（CPE）を引き起こさず、従来の培養条件下ではプラークを形成することも困難です。国内外の多くの研究者が、鶏胚細胞やBHK-21細胞で狂犬病ウイルスのプラーク法を確立することに成功しましたが、これらの方法には明らかな欠点があります。実験条件に非常に厳しい要件があり、温度、湿度、ガス組成などのさまざまな要因を正確に制御する必要があります。また、一部の操作手順は複雑で、専門技術者が習熟するために長期的な訓練を受ける必要があり、これらの方法の普及と応用を大きく制限しています。
狂犬病ウイルス検出におけるHEPESの画期的な応用
研究者は、HEPESが感染細胞に対する狂犬病ウイルスの病原性を高めることを偶然発見しました。この特性に基づいて、研究者は狂犬病ウイルスに対するシンプルで迅速なHEPESプラークエッチング法を革新的に確立しました。
HEPESは腐食スポットの形成を著しく促進します
実験では、感染細胞を37℃で3〜5日間培養し、その後、感染細胞の1つのグループをHEPESで処理しました。処理後、被覆物の底に明らかな細胞病変がはっきりと観察できます。その後、クリスタルバイオレット染色を使用し、腐食スポットがはっきりと見えました。対照的に、HEPES処理を行わなかった感染細胞群は、細胞変性効果もプラーク形成も示しませんでした。この実験結果は、HEPESがBHK細胞における狂犬病ウイルスのプラーク形成に大きな促進効果があることを強く示しています。
HEPESエッチング法は高い感度を持っています
HEPESプラークアッセイは操作が簡単であるだけでなく、ウイルス感染力価の滴定においても良好な性能を発揮します。実験データは、ウイルス感染後のプラーク数とウイルス希釈の間には明確な力価関係があることを示しています。狂犬病ウイルスのCTN-BHK株を例にとると、HEPESプラークアッセイとマウスアッセイをそれぞれ使用して感染力価を決定しました。4回の連続測定後、HEPESプラーク法で測定されたプラーク数は1.0×10°〜4.0×10 * PFU/mlの範囲であり、マウス法で測定された感染力価は6.0〜6.8logまたは1.0×10°〜6.3×10/mlの間であることがわかりました。この結果は、迅速なHEPESプラーク法とマウス法の感度の整合性を十分に示しています。
HEPESエッチング法は優れた利点があります
狂犬病ウイルスCTN-181およびCTN-BNK株の感染力価滴定を研究したところ、HEPESを使用すると、感染細胞に対する狂犬病ウイルスの病原性を効果的に誘発および増強できることがわかりました。具体的な操作方法は次のとおりです。細胞のウイルス感染後、37℃で3〜5日間培養し、50〜100mmol/LのHEPESをメチルセルロース半固形培地のカバーに滴下し、24時間後にクリスタルバイオレット溶液で染色し、室温で乾燥させて、肉眼で腐食スポットの数を直接計算します。以前の文献報告のエッチング方法と比較して、この方法は、速度、簡便性、経済性、感度、習得の容易さなど、多くの利点があります。
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