DNA電解を行うとき,常にバッファ溶液を追加します.一般的に使用されるバッファ溶液には,Tris,アセテート,EDTAを含むTAE,およびTBE (Tris-borate-EDTA) が含まれます.
緩衝器の役割は? 緩衝器の機能の1つは溶液のpHを安定させることです. 電気流が水を通過すると,水は水中から流れます.アノードで酸化反応が起き,酸素と水素イオンが生成される.カソードで減衰反応が起き,水素と水酸化イオンが生成される.長期電泳により,アノード酸とカソードがアルカリ化される.良いバッファシステムには,両極の溶液のpHを基本的には安定させるために強いバッファ能力を持つべきである.電気分泌バッファのもう一つの機能は,溶液に特定の導電性を与え,DNA分子の移動を促進することです.DNAは,電球分解 (バッファ pH=8) の際に負電荷を負い,負電極から正電極へ移動するアルカリ性物質である..
電気分泌緩衝剤のもう1つの成分はEDTAで,その目的はMg2+プラズマをケラートし,電気分泌中にDNaseの活性化を防止することである.核酶はこれらのイオンを必要としているため,EDTA は,核酸分解を防ぐために,これらのイオンをしっかりと保持することができます.しかし,マグネシウムイオンは,制限酵素,DNAポリマーゼなど多くの酵素のコファクターでもあることに注意する必要があります.EDTAの濃度は通常高すぎません (通常は1mM).
デシェンTRISバッファパッケージ
DNA電泳でどちらを使うべきか? それは実験の目的によって異なります. 両方の違いを見てみましょう.
1TBEの伝導性は TAEより大きい.したがって,TAEと比較して,TBEは電泳タンクで過熱を引き起こす可能性が低い.TBEは長期電泳に推奨されます.
2消化反応のために電泳DNAを分離する必要がある場合は,電泳バッファ溶液としてTAEを使用することが推奨されます.
3TBEは,より小さな断片を分離するのに優れている. 300bp未満の断片では,TBEの移動速度は2%アガロースゲルでより速い.
4TAEは,大きな断片の分離に適しています. 2kb以上の断片は,TAE (0.8%アガロースゲル) でより速く移動し,速度はTBEよりも約10%速くなります.TAEはDNA断片の回収に適していますTBEと比較して,TAEは超巻きDNAの解像度が高い.
概要すると,TBE と TAE のどちらが良いのかという問題は一般化できない.最も適したバッファシステムは,実験の特定の目的に応じて選択されるべきである.デシェンによって開発された生物学的バッファは 広いバッファ範囲を持っていますシステムでは, pH 値の幅広い範囲でバッファを準備し,様々な仕様をパッケージングすることができます.相談と購入を歓迎します.
