トリス (トリヒドロキシメチラミノメタン) は,室温25°CでpKaが8.1で,pHが7.0~9の有効バッファ範囲である弱い塩基である.2トリスアルカリの水溶液のpH値は約10です5塩化水素は,通常,この pH 値のバッファを得るために,希望値に pH 値を調整するために加わります.Tris バッファは弱いアルカリ性溶液であるため,溶液でDNAがデプロトン化されます酸溶液を酸酸で置き換える場合,TAEバッファ (Tris/Acetate/EDTA) が得られます.一方"TBEバッファ" (Tris/Borate/EDTA) は,ボリック酸に置き換えることで得られる.核酸電泳実験では,これらの2つのバッファが一般的に使用されます.Trisによって作成されたTAE,TBEなど,DNA電泳のために最も一般的に使用される試料であり,TE (pH 8.0) 主にDNAを溶解するために使用されます.. (TEはTrisとEDTAの組み合わせです.) 1MTris-HCl6.8と1.5MTris-HCl8.8はSDS-PAGEで最も一般的に使用される反応剤です.
TRIS反応剤
遺伝子工学の従来の操作の中で,アガロースゲル電解は最も広く使用されています.アガロースゲル電解は,DNA断片を識別し浄化する通常は水平電泳装置を使用して,電磁場の下で電泳をします.DNA 分子 は ゲル バッファー (通常 アルカリ性) で 負電荷 を 持っ て おり,電気 場 の 中 で 負電極 から 陽電極 に 移行 する電気場の強さと方向,塩基組成,温度,埋め込まれた染料の影響など.
オペレーションプロセス:
1 TEバッファ: (10 mmol/L Tris-HCl, 1 mmol/L EDTA)
電解緩衝器 (50XTAE)
2 電解緩衝剤 (50XTAE): Tris 242g,氷の乙酸 57.1ml,EDTA (0.5mol/L pH 8.0) 100ml
蒸留水で 50 回稀释する.
3 サンプルバッファ (6X):0.25%ブロモフェノールブルー,0.25%キシレンブルー,40% (W/V) サクラソース
4 STETバッファ (pH 8.0) (8%サクラース,0.5%トリトン,50 mmol/L EDTA,10 mmol/L Tris)
1) 100 ml の TAE 電解溶液を測定し, 0.7 g のアガロースを加え,よく混ぜて,マイクロ波レンジに放ち,3 分間熱して,アガロースを完全に溶かす.
2) 乾燥した電気泳容器を消毒ゴムで閉じて,端を少量のアガロース溶液で封印します.カムを配置し,カムと電解プレートの下端間の距離を調整一般的に1-2mmが適しています.
3) 溶けたアガロース溶液を約50°Cに冷却すると,エチジウムブロマイドを5 M Lを加え,エチジウムブロマイドの最終濃度は1.0 m g/m Lになります.混合した後,アガロース溶液を電泳皿に注ぎ,動かないまま置く..
4) ゲルが完全に固まった後 (室温で30〜45分),小心翼々でコンドームを外し,テープを外し,ゲルを電球解剖パッドに置きます.
5) 電子解剖過程では,電子解剖溶液 (1'TAE) を加え,アガロースゲルの表面を約1-2mmの電子解剖溶液で覆いました.
