ルミノール クラシック化学発光反応剤生物検出などの分野で広く使用されていますが,その発光効率は多くの要因によって制限されています.この 記事 で は,低 効率 の 主要 な 理由 を 4 つの 面 から 分析 し て い ます.反応剤保存,反応システム,実験操作,環境干渉
1,反応剤の不適切な貯蔵:酸化と純度低下
ルミノールは光と酸素に敏感です. 茶色の不透明な瓶に閉じ込めてない場合,光は光化学反応を起こし分子構造を損傷します.長期 に 空気 に 晒され たら 酸化 し,炭素 化合物 の よう な 副産物 が 生じ ますこれらの不浄物質は,反応システム内の反応性酸素種 (ヒドロキシル基など) を競争的に消費し,発光効率を低下させる.例えば,銅離子 (Cu2+) の不純物はルミノールと複合体を形成することができる.ダイメチルフォルマミドなどの残留有機溶媒は,過酸化酶 (POD) の活性を阻害する可能性があります.
2,反応システムの不均衡:触媒と酸性/アルカリ性の二重調節
ルミノールの発光は,3アミノファタレートを形成する酸化プロセスに依存し,触媒と酸化剤の共働作用を必要とする.カタライザー濃度や種類が適切でない場合例えばPODの最適なpH値は7.0−8である.0過剰なナトリウムヒドロキシード (NaOH) はPOD構造を損傷し,不活性化させることがあります.十分なアルカリ性がないため,ルミノールの水素基が活性化しない.酸化反応を阻害する.
酵素以外の触媒 (例えばカリウムフェロシアン化) の濃度制御も重要です.鉄離子 (Fe3+) の濃度が高すぎると,"瞬間の閃光"を誘発します反応物質は非常に短時間で完全に消費され, 発光信号を継続的に検出することは不可能になります.データは,Fe3+の濃度が0を超えると.1 mmol/L,ルミノールの光発光半減期は120秒から5秒未満に短縮され,信号取得の信頼性が著しく低下する.
3,実験操作の誤り:詳細が成功や失敗を決定する
実験操作の標準化は,ルミノールの発光効率に直接影響する.パイペットの誤差は一般的な問題である:校正されていないパイペットにより,ルミノールの濃度は理論値から20%以上偏りやすい反応剤の添加順序が正しくない場合も,まず水素過酸化物 (H2O2) を添加し,その後ルミノールを溶けるような異常反応を引き起こす可能性があります.ローカルH2O2濃度が過剰になり,ルミノールが非発光製品に急速に分解する可能性があります..
微流体チップなどの小容量の反応システムでは不均等な混ぜが特に顕著です.混ぜる速度は不十分または時間が短すぎると,ルミノールと酸化物質の接触が不十分である, 濃度グラデーションを形成し,発光信号が"中心は明るい,端は暗い"の分布特性を示し,全体的な検出感度を低下させる.
4,環境 干渉: 光 と 酸素 の 見え ない 破壊 者
ルミノールの発光に及ぼす環境要因の影響は,しばしば過小評価されています.強い背景光 (実験室の?? 光ランプなど) は,ルミノールの?? 光背景を刺激する研究によると,500ルクスの照明条件下では,ルミノールの信号対ノイズ比 (SNR) は暗黒環境と比較して60%低下します.低濃度サンプル (例えば10−9mol/L) の検出が不効率になる.
過剰な酸素含有量も有害です ルミノールの酸化には酸素が必要ですが過剰な酸素は副作用 (水素過酸化物の変異など) を加速し,反応性酸素種の生成を減少させる高湿度環境では,ルミノール粉末が水分を吸収し,凝縮し,溶解性と反応性を低下させる可能性があります. 実験によると,相対湿度が80%を超えると,ルミノールの発光強度は24時間以内に40%まで減少します.
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