HEPESHEPESは,生物化学産業における重要な生化学製剤である.生物学的研究における重要なバッファの一つと考えられる.HEPESの化学名:N-ヒドロキシエチルピペラジン-1-エタヌスルフォン酸素質は白色結晶粉末である. 弱い酸であり,有機化学産業でしばしばツウィテリオンバッファおよび製薬間介剤として使用される.細胞培養のバッファとして選択されるのは その利点のためです:
デシェンの場所とバッファ製品
1HEPES の分解能力は,温度上昇に伴い増加し,温度低下に伴い弱くなるが,他のバッファと比較すると,その分解定数は温度によってあまり変化しません, つまりHEPESバッファ酵素の構造と機能をより良く維持するバッファになります バッファは,より長い時間,恒定的pH範囲を制御することができ,細胞に有毒な効果はありません.
2ほとんどの細胞に必要なpHは7.2-7.4この範囲では,HEPESは良いバッファ容量を持っていますが,最適なpH値は培養された細胞の種類によって異なります.繊維芽細胞は高いpH (7.4-7.7) を好みます.サブカルチャー細胞線は酸性PHを必要とします (7ほとんどの培養媒体は,ナトリウムバイカーボネート (NaHCO3) とCO2システムによるバッファリングに依存する.ガス段階のCO2濃度は,培養基内のナトリウムバイカルボナート濃度とバランスする必要があります.この場合は,細胞培養瓶の蓋をガスの交換を確保するために太りすぎないように螺旋する.
しかし,ある期間保存した後,バッファシステムのpHは,CO2の揮発とともに上昇します.培養溶液は細胞をサブ培養して吹き飛ばすとすぐに紫色になりますこの培養媒質で培養された細胞は 生き延びることが困難です. 細胞が生き延びたとしても,その活性も非常に低く,増殖率は非常に遅いのです.培養溶液にHEPESを追加することでこの問題を回避できます. HEPESは高濃度CO2培養環境の制限をなくすためにバイカーボネートを代替するバッファとして使用できます.使用されたHEPESバッファの最終濃度は一般的に10-25mMです..
HEPES の使用方法:
1. HEPES は,必要な濃度で準備された培養溶液に直接加えられ,その後フィルタリングによって無菌化されます.培養溶液1000mlあたり2.38gのHEPESを加えます.pH を 7 に調整する溶解後,lN NaOH でフィルタリング,無菌化し,使用する.この時点で,使用濃度は10 mmol/Lである.
2保存溶液 (l mol/L) の100倍にも作ることができる.使用前に,培養溶液の99mlをml保存溶液に追加し,最終アプリケーション濃度は依然として10mmol/Lです.lmol/L (100 x) HEPES原溶液の調製方法溶ける 23. 8g HEPES を 90ml の二重蒸留水に, pH を NaOH 1N で 7. 5- 8. 0 に調整し,その後水で 100ml に稀释し,フィルタリングと不妊処理を行い,錠剤 (2ml/ボトル) を配布し, 4°C または - 20°C に保管します.
Desheng Biochemicalは 細胞培養のバッファとして使用すると 思い出させた3時間以上目に見える光にさらされた培養基内のHEPESは,細胞に毒性のある水素過酸化物を生成します.培養基を暗く保存することが推奨されます.
