HEPESは生化学的な企業の重要で生化学的な準備です。生物的研究の分野の重要な緩衝の1時であることを考慮します。HEPESの化学名前は次のとおりです:N-hydroxyethylpiperazine-1-ethanesulfonicの酸は、特性白い結晶の粉で、有機性化学工業のzwitterionic緩衝そして薬剤の中間物として弱い酸、頻繁に使用されます。それは頻繁に利点のために細胞培養に緩衝として選ばれます:
Deshengの位置および緩衝プロダクト
1. HEPESの分解容量は温度の増加と高められ、温度の減少と弱めることができますが他の緩衝と比較されて、分解の定数はHEPESを緩衝をよりよい酵素の構造そして機能を維持するAの緩衝にならせる温度との多くを変えません。緩衝はより長い一定期間のための一定したpHの範囲を制御でき、細胞に対する毒作用をもたらしません。
2. ほとんどの細胞に必要なpHは7.2-7.4です、HEPESにこの範囲でよいバッファ キャパシティがありますが、最適の水素イオン濃度指数は培養される細胞のタイプと変わります。繊維芽細胞は二次培養された細胞ラインは酸性pH （7.0-7.4）を要求するが、より高いpH （7.4-7.7）を好みます。ほとんどの培養基は重炭酸ナトリウム（NaHCO3）および緩衝剤処理のための二酸化炭素システムに頼ります。ガス段階の二酸化炭素の集中は培養基の重炭酸ナトリウムの集中とバランスをとられるべきです。この場合、細胞培養のビンの王冠はガス交換を保障するには余りに堅くねじで締まるべきではないです。但し、ある特定の一定期間の貯蔵の後で、緩衝システムのpHは二酸化炭素の揮発と増加します。現時点で、文化解決はすぐに細胞が二次培養され、吹くとき紫色にさせる、この培養基と培養される細胞を存続すること困難になります。それは存続しても、活動また非常に低く、拡散率は非常に遅いです。文化解決へHEPESを加えることはこの問題を避けることができます。緩衝としてHEPESが高集中の二酸化炭素文化環境の限定を除去するために重炭酸塩を取り替えるのに使用することができます。使用されるHEPESの緩衝の最終的な集中は一般に10-25mMです。
HEPESを使用する方法:
1. HEPESは必須の集中の準備された文化解決に直接加えられ、次にろ過によって殺菌することができます。文化解決の1000mlごとのHEPESの2.38グラムを加え、lN NaOHとの7.2に分解の後でpHを合わせ、ろ過し、そして殺菌すれば現時点で使用は、HEPESの使用集中10のmmol/Lです。
2. それはまた100つのxの貯蔵の解決（l mol/L）に準備することができます。使用の前に、文化解決の99mlはlmlの貯蔵の解決に加えられ、最終的な適用集中は今でも10mmol/L. l mol/L （100 x） HEPESの貯蔵液の準備方法です:23.8g HEPESを90mlによって二重蒸溜される水で分解し、1N NaOHとの7.5-8.0にpHを合わせ、そして100mlに水、フィルターと薄くし、そして殺菌し、そして4℃でガラスびん（2ml/bottle）、店または-20℃を分配して下さい。
、HEPESが3hより多くのために可視ライト--にさらされた培養基で細胞培養のために緩衝として使用された場合細胞に有毒である過酸化水素を作り出すことに思い出すDeshengの生化学的。培養基が暗闇で貯えられることが推薦されます。
